实验动物镇静、止痛、麻醉以及安乐死指南

日期:05-27  1450  属于:新闻资讯
1目的:规范实验动物镇静剂、麻醉剂和止痛剂的使用,以及实验动物安乐死方法,确保人道的处理动物。
 
2范围:根据国际实验动物管理评估与认证协会(AAALAC)要求,参考Laboratory Animal Anaesthesia 和AVMA Guidelines on Euthanasia推荐的动物安乐死方法制定本使用指南。
对于给药方式说明:IP----腹腔注射 SC----皮下注射 IM----肌肉注射 IV----静脉注射  PO----口服
 
3设备与材料:CO2气瓶;配带盖和各种动物品种大小的麻醉诱导箱;麻醉机;注射剂或吸入剂;适当规格的注射器和针;个人防护装备至少包括防护服、手套、帽子和口罩等
 
4.步骤:
4.1麻醉规程

麻醉时应认真检查所用的麻醉/止痛剂的有效使用日期,不可以使用过期的药物。

从开始麻醉到动物清醒必须对动物进行实时监护。麻醉的动物会反应迟钝、无方向感,所以麻醉时应将动物放置笼中或采取适当的措施防止动物造成损伤。动物完全麻醉(完全失去意识)方可开始手术。

麻醉期间应注意对动物采取适当的保温措施,如电热毯或红外线加热灯,防止动物体温降低。

 

4.2对麻醉程度的检测

如果动物有翻身反应或对疼痛和刺激发生反应,如表现蠕动、移动、收回肢体,则手术必须延迟进行。

深度疼痛测试,用手指挤压动物的后肢脚趾,如果动物有反应如缩回后肢,则动物意识未完全消失;如果动物对测试无反应,则为无意识或意识消失,麻醉达到手术要,可以开始手术。

外科手术开始时,动物应充分松弛、对疼痛刺激无反应、呼吸和心率正常。

 

4.3设施

在动物房或手术室实施麻醉。但麻醉时应尽量不要在其它动物听到、看见和闻到的区域进行。

 

4.4局部麻醉

局麻是在小的非创伤性手术时,减轻动物痛苦而采取的措施。局麻的选择将取决于手术所需时间的长短、场所和动物品种。常用的局麻药有盐酸利多卡因和盐酸普鲁卡因。

 

4.5剂量计算

根据动物的体重,计算麻醉药合适的给药剂量。

例如,用氯胺酮+安定麻醉300g的大鼠

氯胺酮的剂量是75mg/kg,安定是5mg/kg

因此,0.300kg×75mg/kg=22.5mg氯胺酮

0.300kg×5mg/kg=1.5mg安定

 

4.6根据动物品种选择麻醉药物、剂量和给药途径

吸入麻醉剂(如异丙烷)所有品种的动物均适用。钢瓶中压缩CO2气体与氧气(50:50)混合至100%的CO2可以用于啮齿类动物短期吸入麻醉剂。

 

4.7.1 CO2麻醉

CO2诱导短暂的失去意识并适用于某些实验过程,如眼眶后静脉丛采血和一些注射。每次只麻醉一只动物。

使用一个与氧气未混合的CO2相连的容器。打开气瓶的主要阀门,通过微调从而调整气体压力。把动物放进气体流动的容器并关上容器盖子。离开动物1-3/2分钟直到动物呼吸缓慢和无意识,从容器中取出动物开始实验。动物将维持20-30秒无意识状态。如果需要再麻醉20秒,追加一次麻醉剂量,不可以连续超过2次追加CO2麻醉。动物在容器中不可以放置超过5/2分钟。

动物将完全恢复,动物一恢复意识就放回原笼中。

在动物放进容器前,通过往眼里滴一滴盐酸丙对卡因更有宜于眼眶后静脉丛采血。局麻可以使动物减少对操作的敏感性并延长动物失去意识的时间,动物大约10秒钟就失去意识。先于采血前眼睛用薄纸擦拭以除去残余的盐酸丙对卡因。

 

4.7.2 常用的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.1小鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.1.1小鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.04 mg/kg
SC or IP
抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定
5 mg/kg
IP
轻微镇静作用;不能止痛
氟胺酮
0.1-0.3 ml/kg
IP
轻度镇静,中度止痛;
氯胺酮
100-200 mg/kg
IM
深度镇静,轻微止痛;缺乏肌肉松弛作用
4.7.2.1.2小鼠麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间(min)
恢复时间(min)
氯胺酮﹠安定
100mg/kg﹠5mg/kg
IP
保定/麻醉
20-30
60-120
丙泊酚
26mg/kg
IV
外科麻醉
5-10
10-15
氟胺铜﹠安定
0.4ml/kg&5mg/kg
IP or IP
外科麻醉
20-40
120-240
丙泊酚
26mg/kg(然后2-2.5mg/kg/min)
IV
外科麻醉
1-12hours
10-15
异氟烷
0.41ml/minat 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
三溴乙醇(阿弗丁)
125-240 mg/kg(使用浓度0.25%)
IP
外科麻醉
15-45
60-120
注: 100%阿佛丁(三溴乙醇+叔戊醇=1:1配成);使用时用生理盐水进行稀释使用。
异氟烷使用需要面罩。
4.7.2.1.3小鼠止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
阿司匹林
120 mg/kg
PO
轻微止痛
-
丁丙诺啡
0.05-0.1mg/kg
SC
中等止痛
8-12 Hours
卡洛芬
5 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
美洛昔康
5 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
4.7.2.1.4小鼠安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有小鼠
可接受方法
CO2
----
成年小鼠
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼
----
所有小鼠
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术
4.7.2.2大鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.2.1大鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.05 mg/kg
SC or IP
抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
氟胺酮
0.2-0.5 ml/kg
IM
轻度/中度镇静,中度止痛;
安定
2.5-5 mg/kg
IP or IM
轻微镇静作用;不能止痛
氯胺酮
50-100 mg/kg
IP or IM
深度镇静,轻微止痛;缺乏肌肉松弛作用
4.7.2.2.2大鼠麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
氯胺酮﹠安定
75mg/kg﹠ 5mg/kg
IP
轻度麻醉
20-30
120
丙泊酚
10 mg/kg
IV
外科麻醉
5
10
氟胺铜﹠ 安定
0.6ml/kg﹠ 2.5mg/kg
IP or IP
外科麻醉
20-40
120-240
丙泊酚
10-12mg/kg(然后0.5-1.0mg/kg/min)
IV
外科麻醉
1-12 hours
10-15
异氟烷
0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
三溴乙醇(阿弗丁)
300 mg/kg
IP
外科麻醉
10-20
45-90
注: 100%阿佛丁(三溴乙醇+叔戊醇=1:1配成);使用时用生理盐水进行稀释使用。
异氟烷使用需要面罩。
4.7.2.2.3大鼠止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
阿司匹林
100 mg/kg
PO
中等止痛
-
卡洛芬
5 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
美洛昔康
5 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
丁丙诺啡
0.01-0.05mg/kg
SC or IV
中等止痛
8-12 Hours
丁丙诺啡
0.1-0.25mg/kg
PO
中等止痛
8-12 Hours
4.7.2.2.4大鼠安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有大鼠
可接受方法
CO2
----
成年大鼠
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼
----
体重<200g
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术颈椎脱臼前需要进行麻醉处理
4.7.2.3豚鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.3.1豚鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.05 mg/kg
SC
抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定
5 mg/kg
IP or IM
深度镇静作用
氟胺酮
1.0 ml/kg
IP or IM
中度镇静,中度止痛;
氯胺酮
100 mg/kg
IM
深度镇静,轻微止痛;缺乏肌肉松弛作用
4.7.2.3.2豚鼠麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
氟胺铜﹠ 安定
1.0ml/kg﹠ 2.5mg/kg
IP or IM﹠IP
外科麻醉
45-60
120-180
氟胺铜﹠ 安定
1.0ml/kg/h﹠ 2mg/kg(每4小时)
IP ﹠IP
外科麻醉
1-12 hours
120-180
氯胺酮﹠ 安定
100 mg/kg﹠ 5mg/kg
IM
保定/麻醉
30-45
90-120
异氟烷
0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
注: 异氟烷使用需要面罩。
4.7.2.3.3豚鼠止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
阿司匹林
87 mg/kg
PO
轻微止痛
-
卡洛芬
4 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
丁丙诺啡
0.01-0.05 mg/kg
SC or IP
中等止痛
大约8-12 Hours
4.7.2.3.4豚鼠安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有豚鼠
可接受方法
CO2
----
成年豚鼠
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
4.7.2.4兔子的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.4.1兔子镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.05 mg/kg
IM
抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定
0.5-2 mg/kg
IP or IM or IV
由轻到重度镇静;不能止痛
氟胺酮
0.2-0.5 ml/kg
IM
轻到中度镇静,轻到深度止痛;
氯胺酮
25-50 mg/kg
IM
中度缓解镇静,中度止痛;缺乏肌肉松弛作用
4.7.2.4.2兔子麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
美索比妥
10-15mg/kg(使用浓度1%)
IV
外科麻醉
4-5
5-10
丙泊酚
10 mg/kg
IV
轻度麻醉
5-10
10-15
氟胺铜﹠ 安定
0.3ml/kg﹠ 1-2 mg/kg
IM ﹠ IV
外科麻醉
20-40
60-120
氟胺铜﹠ 安定
0.1-0.3ml/kg/h﹠ 1mg/kg(每4 小时)
IV ﹠ IV
外科麻醉
1-12 hours
60-120
异氟烷
0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
氯胺酮﹠ 安定
25 mg/kg﹠ 5mg/kg
IM ﹠IM
外科麻醉
20-30
60-90
注: 异氟烷使用需要“Bain's回路”或者“Ayre's三通管”。
4.7.2.4.3兔子止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
阿司匹林
100 mg/kg
PO
轻微止痛
不清晰
卡洛芬
4 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
丁丙诺啡
0.05-0.1mg/kg
SC or IP
中等止痛
8-12 Hours
4.7.2.4.4 兔子安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有兔子
可接受方法
CO2
----
成年兔子
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼
----
体重<1 kg
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(颈椎脱臼前需要进行麻醉处理)
4.7.2.5犬的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.5.1犬镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.05 mg/kg
SC or IM
抗胆碱能作用;
美托咪啶
10-100ug/kg
SC or IM or IV
轻到深度镇静;轻到中度止痛
乙酰丙嗪
0.1-0.25 mg/kg
IM
轻到中度镇静作用
氟胺酮
0.1-0.2 ml/kg
IM
中度到深度镇静,中度止痛;
4.7.2.5.2犬麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间min
丙泊酚
5-7.5 mg/kg
IV
外科麻醉
5-10
15-30
丙泊酚
5-7.5mg/kg(然后0.2-0.4mg/kg/min)
IV
外科麻醉
20-30
15-30
丙泊酚
5-7.5mg/kg(然后0.2-0.4mg/kg/min)
IV
外科麻醉
1-12 hours
10-15
异氟烷
0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
氯胺酮﹠美托咪啶
2.5-7.5 mg/kg﹠ 40ug/kg
IM or IM
轻到中度麻醉
30-45
60-120
注: 异氟烷使用需要“Bain's或者 MaGill回路”。
4.7.2.5.3犬止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
卡洛芬
4 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
美洛昔康
0.2 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
丁丙诺啡
0.005-0.02 mg/kg
SC or IP
中等止痛
8-12 Hours
4.7.2.5.4犬安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有犬
可接受方法
CO2
----
成年犬
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
氯化钾联合其他麻醉药
----
所有犬
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(心内注射氯化钾前先进行麻醉处理)
4.7.2.6小型猪的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.6.1小型猪镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.05 mg/kg
SC or IM
抗胆碱能作用;
安定
1-2 mg/kg
IM
轻到中度镇静作用;
氯胺酮
10-15 mg/kg
IM
镇静;保定
4.7.2.6.2小型猪麻醉药物的选择
注射用 麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
氯胺酮
10-15 mg/kg
IM
镇静;保定
20-30
60-120
丙泊酚
2.5-3.5 mg/kg
IV
外科麻醉
5-10
15-30
丙泊酚
2.5-3.5mg/kg(然后0.1-0.2mg/kg/min)
IV
外科麻醉
20-30
15-30
丙泊酚
2.5-3.5mg/kg(然后0.1-0.2mg/kg/min)
IV
外科麻醉
1-12 hours
10-15
异氟烷
0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
氯胺酮﹠ 安定
10-15 mg/kg﹠ 0.5-2mg/kg
IM ﹠IM
保定/轻度麻醉
20-30
60-90
注: 异氟烷使用需要“Bain's或者 MaGill回路”或者“循环系统”。
4.7.2.6.3小型猪止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
卡洛芬
2-4 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
丁丙诺啡
0.01-0.05mg/kg
SC or IP
中等止痛
8-12 Hours
4.7.2.6.4小型猪安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有小型猪
可接受方法
CO2
----
成年小型猪
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
氯化钾联合其他麻醉药
----
所有小型猪
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(心内注射氯化钾前先进行麻醉处理)
打击头部
----
幼龄猪周龄
条件可接受;要求技术,充分保定,和适当的力量
4.7.2.7非人灵长类的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
阿托品
0.05 mg/kg
SC or IM
抗胆碱能作用;减少唾液,呼吸道分泌物,阻止血管迷走神经反射
安定
1 mg/kg
IM
轻到中度镇静
氯胺酮
5-25 mg/kg
IM
中度镇静;保定;轻微止痛;
4.7.2.7.1非人灵长类镇静剂和诱导麻醉药物的选择

注射用麻醉剂

剂量

给药方式

麻醉深度(轻度/外科麻醉)

持续时间 min

恢复时间 min

丙泊酚

7-8 mg/kg

IV

外科麻醉

5-10

10-15

氯胺酮﹠ 美托咪啶

5 mg/kg﹠ 0.05mg/kg

IM ﹠IM

外科麻醉

30-40

60-120

丙泊酚

7-8 mg/kg (然后0.3-0.6mg/kg/min)

IV

外科麻醉

1-12 hours

10-15

异氟烷

0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)

吸入

外科麻醉

--

--

氯胺酮﹠ 安定

15 mg/kg﹠ 1mg/kg

IM ﹠IM

外科麻醉

30-40

60-90

4.7.2.7.2非人灵长类麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
丙泊酚
7-8 mg/kg
IV
外科麻醉
5-10
10-15
氯胺酮﹠ 美托咪啶
5 mg/kg﹠ 0.05mg/kg
IM ﹠IM
外科麻醉
30-40
60-120
丙泊酚
7-8 mg/kg (然后0.3-0.6mg/kg/min)
IV
外科麻醉
1-12 hours
10-15
异氟烷
0.41ml/min at 4L/min Fresh gas flow (使用浓度2%)
吸入
外科麻醉
--
--
氯胺酮﹠ 安定
15 mg/kg﹠ 1mg/kg
IM ﹠IM
外科麻醉
30-40
60-90
注: 异氟烷使用需要“Bain's回路或者 Ayre's三通管(体重<10 kg)”或者“MaGill回路(体重>10 kg)”。
4.7.2.7.3非人灵长类止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
氟胺铜
0.3ml /kg
IM
良好止痛
-
卡洛芬
3-4 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
美洛昔康
0.1-0.2 mg/kg
SC
中等止痛
24 Hours
丁丙诺啡
0.005-0.01 mg/kg
IM or IV
中等止痛
8-12 Hours
吗啡
1-2 mg/kg
SC or IM
中等止痛
4 Hours
4.7.2.7.4非人灵长类安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有非人灵长类
可接受方法
吸入麻醉CO2
----
成年非人灵长类
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
4.7.2.8鸟的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.8.1鸟镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物
剂量
给药方式
效果
氯胺酮(>1 kg)
15-20 mg/kg
IM
轻微止痛;保定
氯胺酮(<1 kg)
30-40 mg/kg
IM
轻微止痛;保定
4.7.2.8.2鸟麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
氯胺酮﹠ 安定
20-40 mg/kg﹠ 1-1.5mg/kg
IM ﹠IM
中等外科麻醉
20-30
30-90
4.7.2.8.3鸟止痛药物的选择
止痛剂
剂量
给药方式
效果
效果持续时间
丁丙诺啡
0.01-0.05mg/kg
IM
中等止痛
8-12 Hours
4.7.2.8.4鸟安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
戊巴比妥钠
100-200 mg/kg
所有鸟
可接受方法
CO2
----
成年鸟
可接受方法;幼龄动物和新生动物需要延长时间
颈椎脱臼
----
所有鸟
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术(脱臼前进行麻醉处理)
胸部压迫
----
小到中型鸟类
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术
4.7.2.9鱼的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.9.1鱼镇镇静、麻醉、止痛和诱导麻醉药物的选择
注射用麻醉剂
剂量
给药方式
麻醉深度(轻度/外科麻醉)
持续时间 min
恢复时间 min
MS222
25-300 mg/l
沉浸
外科麻醉
   
盐酸苯佐卡因
25-100 mg/l
沉浸
外科麻醉
2 分钟诱导
撤消后5分钟恢复
注:1.苯佐卡因配置:首先200 mg苯佐卡因+5 ml 丙酮,进行溶解,再加入8 L 水配置成25ppm(25mg/l)的苯佐卡因。
2.小到中型鱼(金鱼和鲑鱼),MS222 浓度为100 mg/l。
4.7.2.9.2鱼安乐死的药物和方法选择
药物或方法
剂量
试用动物
备注
MS222
≧300 mg/l
所有鱼类
可接受方法
盐酸苯佐卡因
≧100 mg/l
成年鱼类
可接受方法
脑脊髓刺毁法
----
所有鱼类
条件可接受;操作人员需要接受培训,并具备熟练的技术
4.8保存记录

需要所有麻醉程序的手写记录文件。记录应该包括但不仅局限于以下几点:

IACUC动物使用和管理方案编号

麻醉日期、时间和负责人签字

品系和个体或动物组别标记

使用的麻醉剂、止痛剂或镇静剂名称、剂量、给药途径和时间

如果需要在整个过程中监测生理参数(如心率、呼吸次数/节律、体温、粘膜色泽和足部的松弛度等)

 
4.9术后恢复

动物可与正处于恢复期的同一品系动物放在一个笼具中,也可单独放在一个饲养笼内,但不要与未麻醉的动物放在一起,防止恢复期动物受伤。动物恢复期必须保温。当动物恢复正常活动时,可以与其它动物放回同一笼或一个动物房间。随后几天必须定时对动物进行观察保证不出现并发症。

 

以上信息来源于北京大学实验动物中心

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